伏马毒素 ELISA 试剂盒 酶联免疫法检测伏马毒素

伏马毒素试剂盒用竞争性酶联免疫法来检测伏马毒素。

应用领域:

谷物 

 检测时间:

20分钟(不包括样品前处理时间)

检测限:0.75ppm

检测范围:0ppm-60ppm

 


特异性反应

   



化合物

   

交叉反应率%

   



伏马毒素B1

   

100

   



伏马毒素B2

   

124±11

   



伏马毒素B3

   

100±10

   


 

1.测试原理 测试是通过包被着固相结合的伏马毒素抗体的 塑料微孔板上来执行的。标准品,样品溶液和 酶耦合物都加入到微孔中。第一次培养,游离 的伏马毒素和酶耦合物竞争结合到伏马毒素抗 体上。培养后,任何没有结合物质都将被冲洗 掉。结合在固相上面的酶活性取决于酶底物的 数量。酶就会把无色染料变成蓝色。加入终止 液后,蓝色会变成黄色。然后通过450nm 读数, 颜色的密度和样品中伏马毒素的浓度成反比。

 2.提供的试剂

预混合板:没有包背任何抗体的空白孔,独立可拆分。

COD MF100:96孔(12×8)

微孔板:包被有伏马毒素抗体的微孔板,独立可拆分。

COD MF100:96孔(12×8)

微孔板可独立分拆,这样的话每个微孔可以单独使用。

伏马毒素B1标准液:5瓶1.5ml的伏马毒

素药物标准溶液,浓度分别是0 ppm, 0.75ppm, 4ppm, 20ppm , 60 ppm,白盖塑料 瓶

酶耦合物(enzymeconjugate):褐色塑料瓶

CODMF100:18ml

10 倍浓缩的冲洗液(washing buffer 10×): 含50mL 的塑料瓶

发展液(developing solution):棕色塑料瓶

CODMF100:14ml

终止液(stop solution):白色盖子玻璃瓶 

 

CODMF100:8ml

 

3.实验需要但是没有提供的材料

- 20-200ul,200-1000ul的可变微量取样枪   以及合适的枪头

-50-300ul可调式多道移液枪以及合适的    枪头

-甲醇液

-NaCl(氯化钠)

-  天平,研磨,旋涡

-  蒸馏水或去离子水

- 高速或低速搅拌机或者Shaker(400rpm)

-  离心机

-  磨具

-  纸巾或类似的吸水物

-  450nm 的酶标仪


4.使用者需要注意的警告

-  非诊断试剂

- 有些试剂包含防腐剂,终止液包含硫酸具有腐蚀性。

-  取试剂时要小心,避免接触到皮肤,眼睛和 黏膜。

5.处理和存储说明

-  在2-8℃储存,不能冷冻

- 把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝薄

袋。

-  不要使用过期产品

-  不要混合不同成分

-  严格按照随试剂所附的说明书操作

6.样品准备

-  仔细混匀样品,细细研碎

-  称样及如何加提取液如下表:

 


样品

   

NaCl

   

提取液

   



50g

   

10g

   

250ml   70%甲醇溶液

   



5g

   

1g

   

25ml   70%甲醇溶液

   



50g

   

/

   

250ml  70%甲醇溶+4%NaCl

   



5g

   

/

   

25ml  70%甲醇溶液+4%NaCl

   


70%的甲醇溶液+4%NaCl的配制,以100ml溶液为例:称取4克氯化钠加入20ml蒸馏水或者去离子水,再

加70ml 甲醇,最后加去离子水或者蒸馏水定容到100ml。

  -彻底震荡3分钟;

-过滤样品(要用好的滤纸,建议使用 WHATMAN1),取滤液。

-将滤液用蒸馏水用1:20的比例稀释

例如(50ul滤液+950ul蒸馏水)

- 这里建议称取50克样品为好,结果更加准 确;

7.工作溶液的准备

伏马毒素 B1 标准液:即时使用。

酶耦合物:即时使用

冲洗缓冲液:用蒸馏水按 1:10 的倍数 稀释浓缩冲洗液(1+9),注意:当有结晶体存在时,在室温搅拌直至完全溶解。

稀释后的冲洗缓冲液可以在室温下保24小时或者在2-8℃保存2个星期。

发展液:即时使用。(避光保存)

终止液:即时使用。(含2M 的硫酸,小心使用)

8.酶免疫操作过程

8.1样品准备

-  使用前将所有试剂及样品恢复到室     温(2 小时),

-  使用后迅速将所有试剂2-8℃储存

-  不要更改操作流程,尤其是:

-  不要延长或者缩短第一次培养  

时间

- 不要在大于25℃和低于18℃的室温培养试剂板

-  培养时不要摇晃或者振荡试剂 

-  使用准确,精确的微量加样枪

-  一旦开始实验,一次性完成操作,不 

要停顿

- ELISA的重现性很大程度上依靠冲洗过程的效率和一致性,所以一直要遵循所描述的操作过程。

-  每次必须使用新的加样头,避免交 

叉污染

- 不要让加样头直接接触微孔板内的液体或者微孔板孔壁

- 避免直接光照到微孔板,建议盖住微孔板,不要用封条

8.2操作步骤

1.预先安排好实验流程,记录好每个标准品,样品的位置,确保必须按照操作进行, 如果条件允许,建议同时做平行实验。把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝薄袋中,并用夹子夹好。

同时也准备好同样数量无包背抗体的空白预混合孔,建议每次实验不要超过32 个样品包括标准品在内。

2.使用加样枪吸取100ul 的酶偶合物到每个预混合孔。

3.加50ul 的样品和标准品到加好酶偶合物的预混合孔中。

4.使用多道加样枪混合均匀预混合孔中的液体,然后立即取100ul 的液体转移到相对应的包被抗伏马毒素的微孔中。 注意:每一次加样必须使用新的加样头,避免交叉污染。

5.室温(20℃-25℃)下培养 10 分钟

不要在第一个培养时间段延长时间,不要使用自动振荡器

6.冲洗过程

-  倒掉小孔中的液体

- 用装有工作冲洗液的洗瓶冲洗整个小孔,然后倒掉冲洗液

- 在吸水纸上倒扣微孔板并且重重的拍打微孔板,吸去多余的水滴

- 重复刚才的冲洗程序 3次

不能让小孔干掉

7.发展

- 使用多道加样枪吸取100ul 的发展液     到每个小孔,充分地振荡一会儿。

8.在室温(20-25℃)培养10 分钟。

9.使用多道加样枪吸取50ul 的终止液     到每个小孔,并且充分地振荡。

10.酶标仪在450nm 光栅下读数,60分      钟内必须读数。

9.结果计算

计算每个样品和标准品的吸光度值。 计算出样品和标准品的吸光度值除以零浓度标准品吸光度值(B0)的比值,再乘以100 变成百分比。因此最大结合率的吸光度值(B0)的值应该是100%,吸光度比值用百分比表示。

标准品(样品)吸光度值 B

----------------------------------×100=-----(﹪)

零浓度标准品吸光度值 B0

 

 

通过 B/B0 的比值可以制定出相应的 曲     线,并且画出标准曲线。

在曲线中添加入每个样品的B/B0 值和相     应的浓度。

通过样品的吸光度比值可以通过曲线计算   出实际的浓度。

 

10.结果讨论

详细的结果出来以后,必须去检查操作    流程,获得的数据和说明书上提供的来对比,如果数据和说明书上的不符,建议去控制试剂的终了数据,吸光度值波长的记录和操作流程。如果没有操作失误,请联系我们的技术支持。

警告:试剂必须安说明书上的温度保 

存。

 

11.样品标准曲线

 图片1.jpg