玉米赤霉烯酮检测试剂盒

说明书

1、概述

玉米赤霉烯酮(Zearalenone)具有雌激素作用,主要作用于生殖系统,可使家畜产生雌激素亢进症。妊娠动物食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸形,给畜牧场造成巨大经济损失。

2、实验原理

本试剂盒采用间接竞争一步法。在酶标板中同时加入标准品(或样本)、酶标二抗、玉米赤霉烯酮抗体,酶标板上包被的抗原与加入的标准品(或样本)中的抗原竞争结合加入的玉米赤霉烯酮抗体,同时酶标二抗与玉米赤霉烯酮抗体结合。用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物玉米赤霉烯酮浓度呈负相关,与校准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样本中玉米赤霉烯酮的含量。

3、技术指标

3.1检测时间:20分钟(不包括样品前处理)

3.2检测范围:30ppb—810ppb

3.3试剂盒灵敏度:0.15ppb

3.4交叉反应率:

   玉米赤霉烯酮…………………………………100%

3.5样本最低检测限

   饲料、粮食谷物………………………………30ppb

4、试剂盒组成

酶标板…………………………………………2x48孔

标准品…………………………………………5x1ml/瓶

0、 30、 90、 270、 810(ppb)

(注意:因为谷物样品在前处理过程中1:200倍稀释,标准品实际浓度为标定的1/200,所以样品浓度无需校正。)

 酶结合物………………………………………1x7ml/瓶

抗体溶液………………………………………1x7ml/瓶

底物溶液………………………………………1x12ml/瓶

终止液…………………………………………1x10ml/瓶

样本稀释液……………………………………2x50ml/瓶

浓缩洗涤液(10x)…………………………1x50ml/瓶

说明书…………………………………………1份

5、所需仪器和试剂

 5.1仪器:酶标仪、离心机、涡旋仪、恒温箱、天平(感量0.01g)、刻度移液管、量筒、称量勺等;

5.2微量移液器:单道20-200VL、100-1000VL、多道300VL;

5.3试剂:无水乙醇、去离子水。

6、试剂配制

 6.1洗液工作液(1x):用去离子水将浓缩洗涤液(10x)按1:9 体积比进行稀释。即1份浓缩洗涤液(10x)+9份去离子水,用于酶标板的洗涤。洗液工作液在4℃环境下可保存一个月。

 6.2样品提取液:40%乙醇溶液,取纯乙醇用去离子水按6:4体积比进行配置(即6份去离子水+4份纯乙醇)

 

7、样本前处理

 7.1饲料、粮食谷物等样本前处理

 (1)称取5.00±0.05g的样本,加入25ml 40%乙醇溶液(样品提取液),震荡2min;

(2)4000rpm离心5min;

(3)取25ul上清加入975ul样本稀释液,漩涡,混匀;

(4)取混匀后的溶液50ul进行检测。

稀释倍数1倍

8、酶联免疫操作步骤

8.1回温:实验前将各种试剂移至室温(20-25℃)平衡至少30分钟,按前述方法配置试剂,备用。

8.2取反应孔:按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔条放回铝箔袋,保存于2-8℃。

8.3加样:向对应孔加标准品/混匀的样品50ul,标准品/样品建议做重复,然后向每个孔加入酶结合物50ul和抗体50ul,轻轻震荡混匀,25℃避光反应15分钟。

8.4洗板:甩干孔内液体,用稀释好的洗液工作液250ul/孔洗板4次,每次浸泡30秒,最后一次洗完板后,在吸水纸上拍干。

8.5显色:每孔加入底物溶液100ul,轻轻震荡,25℃避光显色5分钟。

8.6终止:每孔加入终止液50ul,终止反应(此时蓝色应转为黄色),终止液加入顺序应与底物液加入顺序一致。

8.7读数:用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度值(OD值),在加入终止液后5分钟内进行检测。(建议用双波长450/630nm检测)

9、操作要点

9.1为了提高检测结果的准确性,建议标准品及样本均点双孔测定。每次检测均需做标准曲线。

9.2加样:每次加标准及样本时,请更换一次性的干净吸头,避免交叉污染。加样时应尽量轻缓,避免起泡,将样本加于板孔底部,切勿沿孔壁加样,单次实验建议不要超过48孔,单次加样时间最好控制在10分钟内,如样本数量多,最好使用排枪加样。

9.3孵育:为防止样本蒸发或污染,避免阳光照射,孵育过程中酶标板必须覆上遮挡物,实验过程中酶标板应避免处于干燥的状态。

9.4洗板:洗板过程非常重要,不充分的洗涤容易造成假阳性。酶联免疫分析中的重现性很大程度上取决于洗板的一致性,请严格按照说明书要求洗板。

9.5显色:当加入底物溶液后,每隔3分钟可观察一下显色情况,当标准品前3-4孔有明显梯度蓝色,后3-4孔显色不明显时,即可加入终止液终止反应。反应孔颜色的深浅与实验温度及显色时间成正比,即实验温度越高、显色时间越长颜色越深。

9.6底物溶液应为无色或浅蓝色,如果颜色严重变深说明已经变质,应当弃用。底物溶液易受污染,请避光妥善保存。

9.7实验环境、检测试剂及样本的最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致试剂盒吸光度值和灵敏度发生变化,影响检

测结果。当0标准的吸光度值小于0.5时,表明该试剂盒可能变质失效。

10、结果分析

10.1百分吸光度值的计算:获得的每个浓度标准品和样本的吸

光度值(B)除以第一个0标准品的吸光度值(B0),再乘以100%。

B

百分吸光度值(%)=----------×100%

B0

B:标准品或样本的平均吸光度值

B0:0标准品的平均吸光度值

标准曲线的绘制与计算:以标准品的百分吸光度值为纵坐标,以标准品浓度的对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光度值代入标准曲线中,读出样本对应的浓度,再乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。

11、储存条件及有效期

11.1未开封的试剂盒避光保存于2-8℃,有效期为12个月。

11.2 酶标板开封后极易受潮变质,放于带有干燥剂的铝箔袋中

2-8℃密封防潮保存,可保存一个月。(建议开封后一月内用完)

提示:本产品检测结果仅供参考,如需确证,请参照国家相关标准方法执行。